Hoechst33342染色试剂盒

产品简介

Hoechst33342染色试剂盒可用于细胞凋亡检测,也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。Hoechst33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA 的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与 DNA 结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。Hoechst 33342的最大激发波长为 346nm，最大发射波长为460nm;Hoechst 33342和双链DNA结合后,最大激发波长为350nm,最大发射波长为461nm

本Hoechst 33342染色试剂盒可直接用于活细胞或组织的细胞核染色,也可用于固定细胞或组织的细胞核染色

试剂盒组合

各组份储存条件

Hoechst33342液-20℃避光保存，B液2-8°C保存

有效期

一年

检测方法

流式细胞仪

荧光显微镜

激光共聚焦

样本类型

悬浮细胞

贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器

1、PBS

2、纯水

3、移液器及吸头

4、离心机

5、流式细胞仪或荧光显微镜

使用注意事项

1、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3、染色后请尽快检测，染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色也可不用多聚甲醛固定，其他方法请参阅相关资料。

4、染色工作液的配制:

根据样品数用PBS将Hoechst染色液10倍-100倍稀释，配制成染色工作液。

5、细胞涂片的制备:

贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，1000-2000rpm离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1X10/ml，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲醛固定5min;

6、用PBS洗涤涂片两次。

7、加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-20分钟。

8、用10倍稀释的试剂B洗涤涂片。

9、用荧光显微镜检测结果。染料-DNA复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。

结果分析

1、置于荧光显微镜下，选用340-350nm 的激发光观察:在荧光显微镜下，活细胞呈弥散均匀蓝色荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光。如果见到3个或3个以上的 DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。

注意事项

1、本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。