吖啶橙染色试剂盒

产品简介

吖啶橙(Acridine Orange，AO）为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中 DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链 DNA(F>530nm)。因此，在荧光显微镜下观察，叫吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

试剂盒组合

储存条件

-2°C避光保存

有效期

一年

检测方法

流式细胞仪

荧光显微镜

样本类型

悬浮细胞

贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器

1、PBS

2、水

3、移液器及吸头

4、荧光显微镜

5、流式细胞仪

使用注意事项

1、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

1、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

2、染色后立即进行分析。

3、染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

4、染色缓冲液的配制:

5、根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100uL试剂B加900 uL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。

6、收集样本细胞，细胞数量在10X10个以内。

7、用PBS洗涤细胞两次。

8、用500 u L-1ml 染色缓冲液将细胞重悬，使细胞浓度约10°个/ml。5、取95ul细胞悬液，加入 5ul AO染色液。

9、轻轻混匀后4℃避光孵育10-15分钟。

10、滴加至载玻片上，用盖玻片封片。

11、荧光显微镜检测结果。最大激发波长为488nm。

结果分析

1、在荧光显微镜下，选用488nm激发光镜检:AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色。当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒或黄绿色碎片。

注意事项

1、本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

4、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

5、AO有毒，避免皮肤或粘膜与试剂接触。