CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

细胞简介

细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒Cell Counting Kit-8(CCK-8)是应用新型的水溶性四唑盐2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。

本四唑盐在电子载体存在的情况下能够被线粒体内的一些脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan，生成的Formazan量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。

CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，CCK-8溶液很稳定，对细胞没有毒性，可以长时间孵育细胞。CCK-8法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高，无放射性，检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT, XTT, MTS和 WST-1高。

试剂盒组合

储存条件

2-8°C避光保存

有效期

一年

检测方法

酶标仪

使用样本

动物细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器

仪器准备

1、带有450mm滤光片的酶标仪

2、CO2培养箱

试剂准备

1、纯水

2、PBS

试剂准备

1、移液器及吸头

2、96孔培养板

使用方法

1、使用方便:仅使用单一试剂。

2、灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽。

3、结果稳定:试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠。

4、无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低。

5、适合于高通量药物筛选。

使用方法

1、本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3、 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。

细胞活性、细胞增殖-毒性检测

1、 收集细胞，加细胞悬液10Oul(约 5000-10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充)。每板设对照（加10O1l培养基）。

2、置37°℃，5% CO2孵育过夜，倒置显微镜下观察。

3、每孔加入10ul待检测药物溶液，37°C孵育。

4、每孔加入10 ul CCK-8溶液，37°C孵育1-4小时。

5、测定450 nm各孔的吸光值，如无450nm滤光片，可以使用450-490nm的滤光片。

6、同时设置空白孔（培养基和CCK-8溶液，无细胞），对照孔(不加药培养基和CCK-8溶液，有细胞)，每组设定3-5复孔。

细胞活力计算

1、将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。

2、细胞活力%=((加药细胞OD-空白OD)/(对照细胞OD-空白OD) ) ×100。

3、抑制率%=(（对照细胞OD-加药细胞OD)/(对照细胞OD-空白OD) ) ×100。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底.避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。