SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

细胞简介

SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是一种替代MTT法的细胞活性检测方法。 SRB可与生物大分子中的碱性氨基酸结合，在490nm~520nm波长处其OD值与活细胞数成良好的直线关系。在515nm的OD读数，可用做细胞数的定量。 SRB法比MTT法稳定性更高。SRB法可以用于悬浮细胞的检测。

试剂盒组成

储存条件

2-8°C避光保存，长期存放-20°C避光保存

有效期

一年

产品特点

1、稳定性高。

2、没有严格时间限制，固定后或SRB结合后的细胞均可存放，样品7天后测定的OD值下降不超过2%。

3、SRB法对于测定悬浮细胞无细胞损失，结果灵敏准确，重复性好

仪器准备

1、带有450nm滤光片的酶标仪

2、CO2培养箱

试剂准备

1、PBS

2、纯水

耗材准备

1、移液器吸头

2、96孔培养板

使用方法

1、接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。

3、洗细胞时充满孔后保持一会倒掉即可，也可以用排枪或洗板机。

4、OD值在1-2之间较好。

以下以96孔板100ul培养基培养细胞为例，如果用于其他方法培养的细胞，等比例调整试剂用量即可

试剂配制

1、1X洗涤液D:根据样品数量，用纯水100倍稀释100X洗涤液D。

2、1X溶解液:根据样品数量，用纯水10倍稀释10X溶解液

试剂配制

1、取出培养好待测的96孔板。

2、在培养基表面小心加入50ul固定液（悬浮细胞加10Oul固定液)，静置5分钟后放入4℃冰箱30分钟-1小时。（注:贴壁细胞可弃培养基后加入用纯水3倍稀释的固定液:悬浮细胞必须直接在培养基上加入固定液，否则容易导致细胞损失。轻加在培养液面，静置5分钟后再将平板移至4℃放置1小时，可使悬浮细胞固定在培养孔底部)。

3、弃固定液。

4、每孔10Oul洗涤液B洗一次，然后用纯水洗3-5次，室温晾干。

5、加入10Oul染色液，室温避光振荡染色15-20分钟。

6 、弃染色液。

7、用1X洗涤液D洗3-5次，至未结合的剩余染色液洗净为止。室温干燥。

8、加入100ul 溶解液，室温避光振荡5分钟。

9、酶标仪测定515nm或540nm吸光度。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。