Calcein AM细胞增殖与毒性检测试剂盒

细胞简介

荧光分析法细胞活性检测试剂盒采用可对活细胞进行荧光标记的细染色试剂，检测细胞增殖情况。可以对活细胞进行极其灵敏的定量分析，可在30分钟内氇测出低至50个活细胞。

Calcein AM是一种非荧光的疏水性化合物，可轻松穿透完整的活细胞。当荧光染色试剂其进入到细胞质后，细胞内酯酶会将其水解产生一种亲水性强荧光化合物，保留在细胞质中，并可在37°C下测定Ex /Em = 485 /515nm。测得的荧光强度与活细胞的数量成正比。该检试剂盒提供简单易用，非放射性和高通量的细胞增殖检测方法，进行细胞存活力，趋化性，细胞毒性和细胞凋亡检测。

Calcein AM的细胞毒性很低，不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性。

试剂盒组成

储存条件

2-8°C避光保存，长期存放-20°C避光保存

有效期

一年

产品特点

1、使用方便:仅使用单一试剂;

2、灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽;

3、结果稳定: 试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠;

4、无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低;

5、适合于高通量药物筛选

产品应用

荧光酶标仪

仪器准备

带有450nm滤光片的酶标仪

CO2培养箱

仪器准备

PBS

纯水

耗材准备

移液器吸头

96孔培养板

使用方法

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2、染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开蝶旋盖。

3、试剂A为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。

4、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

5、由于Calcein-AM的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。6、 Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。

7、试剂A母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

 细胞样本处理

1、收集细胞，加细胞悬液100ul(约5000-10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充)。每板设对照（加10O培养基）。

2、置37℃，5%CO2孵育过夜，倒置显微镜下观察。

3、每孔加入10ul待检测药物溶液，37°C孵育。

4、到待测时间点进行细胞活性检测

试剂配制

1、从冰箱中取出荧光染色试剂，室温溶解后混匀，离心至管底部。

2、加10ul荧光染色试剂到5-10ml HBSS缓冲液中，涡旋混匀，配成染色工作液。

活性检测

1、在1000g离心细胞培养板5分钟，小心移除培养基，避免吸掉细胞。

2、用PBS洗涤细胞一次，离心，弃PBS。

3、每孔加入10Oul染色工作液，37°C孵育15-30分钟。

4、测定激发波长488 nm，发射波长515nm各孔的荧光强度。荧光强度高细胞活性强，活细胞数量多。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。