金少源(上海)生物科技有限公司
- 4008-723-722
细胞名称 | |
| 人髂动脉内皮细胞分离自髂动脉组织；髂总动脉位于人体的盆腔，人的髂总动脉有两条，也就是临床上左右两条分支，它是由腹部最主要的动脉演化而来，由腹部的腹主动脉沿着人体的脊柱方向向下进行，到达第4腰椎后开始分成两支，这就是左右髂总动脉。动脉是介于心室与毛细血管之间的管道，它接近心室的部分，管径大，管壁较厚。经过反复分支，管径逐渐变小，管壁变薄，最后形成与毛细血管构造相似的毛细血管前小动脉，与毛细血管相接。动脉的管径大小和管壁的厚薄，虽相差很大，但构造上均有共同之处。一般均由3层膜组成，最内层称为内膜，由内皮及纵行排列的结缔组织构成；中间的一层称为中膜，由环形排列的组织构成；最外的一层叫外膜，由纵行排列的结缔组织构成。动脉内皮细胞是覆盖在主动脉内面的单层细胞，可分泌一系列血管活性物质而保持血管稳态，当其受到炎症或其它因素刺激后稳态被破坏而导致一些心血管疾病的发生。因此，动脉内皮细胞已成为研究心血管疾病发病机制及治疗药物不可缺少的工具。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁(单层鳞状上皮)的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最小的微血管。 |
细胞规格 | 5x10⁵cells/T25或1mL冻存管 |
细胞来源 | 人 |
细胞品牌 | 金少源生物 |
组织来源 | 髂动脉 |
生长特性 | 贴壁 |
细胞形态 | 内皮细胞样 |
包被条件 | PLL(0.1mg/ml)，明胶(0.1%) |
传代特性 | 可传2-3代 |
传代比例 | 1:2 |
换液频率 | 每2-3天换液一次 |
培养基 | 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5% |
方法简介
金少源实验室分离的人髂动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测
金少源实验室分离的人髂动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人髂动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用金少源配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
使用方法
人髂动脉内皮细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈内皮细胞样，在金少源技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1、取出T25细胞培养瓶
用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2、贴壁细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3、细胞收货脱落
1) 收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；
3) 经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)；
5) 原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4、细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4、建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和金少源技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5、该细胞只可用于科研
1) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核；
2) 本产品未通过用于活体诊断的审核；
备 注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考。
