金少源(上海)生物科技有限公司
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细胞名称 | |
细胞描述 | 大鼠脉络膜血管内皮细胞分离自眼球脉络膜组织；脉络膜在视网膜和巩膜之间，含有 丰富血管和色素细胞，对外力冲击的耐受性较视网膜差，当眼球受到从前面来的外力的冲 击作用通过玻璃体传到后极部时，坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用，使脉络膜在内外两 种作用夹攻下而发生破裂和出血。脉络膜呈暗褐色，围绕视神经乳头部有照膜，为青绿色 带金属光泽的三角形区。脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜，由纤维组织、小血管和毛 细血管组成，软而薄，棕红色，在巩膜和视网膜之间，续连于睫状体后方。脉络膜的血循 环营养视网膜外层，其含有的丰富色素起遮光暗房作用。主要功能是营养视网膜外层及玻 璃体，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同时对视觉系统起保护作用，对整个视觉神经 有调节作用。续连于睫状体后方，含丰富的血管和色素细胞，有营养和遮光作用。 |
细胞规格 | 5x10⁵cells/T25或1mL冻存管 |
细胞来源 | 大鼠 |
细胞品牌 | 金少源生物 |
组织来源 | 脉络膜组织 |
包被条件 | PLL(0.1mg/ml)，明胶(0.1%) |
培养基 | 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 |
换液频率 | 每2-3天换液一次 |
生长特性 | 贴壁 |
细胞形态 | 内皮细胞样 |
传代特性 | 可传2-3代 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养条件 | 气相：空气，95%；CO₂，5% |
方法简介
金少源实验室分离的大鼠脉络膜血管细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消 化法并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×105 cells/瓶。
质量检测
金少源实验室分离的大鼠脉络膜血管细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
大鼠脉络膜血管细胞体外培养周期有限；建议使用金少源配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片。
使用方法
大鼠脉络膜血管细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈内皮细胞样，在金少源技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1、取出T25细胞培养瓶
用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2、贴壁细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3、细胞收货脱落
1) 收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；
3) 经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4、细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4、建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和金少源技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5、该细胞只可用于科研
1) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核；
2) 本产品未通过用于活体诊断的审核。
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考。
