方法简介

金少源实验室分离的人骨髓单个核细胞采用取骨髓、通过密度梯度离心法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

金少源实验室分离的人骨髓单个核细胞经检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

人骨髓单个核细胞体外培养周期有限；建议使用金少源配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片。

使用方法

人骨髓单个核细胞是一种半贴壁半悬浮细胞，细胞形态呈圆形，在金少源生物技术部标准操作流程下，细胞不增殖；不传代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1、 取出T25细胞培养瓶

用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2、半贴壁半悬浮细胞处理

1) 收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用吸管吸取PBS，吹洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；经1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀①；

2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，收集细胞悬液至离心管中；经1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀②；

4) 吸取5ml新鲜完全培养基，重悬细胞沉淀①、细胞沉淀②,把①、②混匀。

5) 用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，按实验需求接种于实验器皿内，然后补充适量新鲜的完全培养基，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养； 

6) 待细胞状态稳定后，用于实验；可以每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。

3、细胞收货脱落

1) 收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；

3) 经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。

4、细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。          

注意事项

1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4、建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和金少源技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。   

5、该细胞只可用于科研   

1) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核；  

2) 本产品未通过用于活体诊断的审核。

备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考。