方法简介

金少源实验室分离的大鼠外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

金少源实验室分离的大鼠外周血单个核细胞经过检测，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

大鼠外周血单个核细胞体外培养周期有限；建议使用金少源配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片。

使用方法

大鼠外周血单个核细胞是一种悬浮细胞，细胞形态呈圆形，在金少源技术部标准操作流程下，不建议传代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1、 取出T25细胞培养瓶

用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2、 悬浮细胞处理

1) ) 收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；

2) 1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；

3) 加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞；将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4) 若遇到悬浮细胞团块较大，无法机械吹散时，向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中，用吸-管轻轻吹打混匀，37°C温浴2-3min，消化结束后，加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化，用吸管轻轻吹打，分散细胞；1200rpm离心5min，弃上清，收集细胞沉淀；

5) 加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀；按传代比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

6) 待细胞状态稳定后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。        

注意事项

1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4、建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和金少源技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术大鼠员跟踪、回访直至问题得到解决。   

3、该细胞只可用于科研   

1) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核；  

2) 本产品未通过用于活体诊断的审核。

备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考。