细胞接收后的处理

1、复苏细胞
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

a、物流运输后可能会引起少量贴壁细胞从瓶壁脱落，先将细胞置于37度培养箱中稳定2-4h。

b、将稳定后的细胞转移到细胞超净台，去除封口膜。贴壁细胞可直接将培养基倒入50mL离心管中保存用于后续培养，原瓶留取4-5mL培液即可；悬浮细胞可以将细胞吸至50mL离心管后离心，留取上层培养基作为后续培养使用，将细胞用原培养基接种至培养瓶继续培养。。

2、细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养

贴壁细胞

a、去除旧的培养基，用无菌PBS对细胞进行润洗后加入1.5mL的胰酶进行细胞消化（加入胰酶后置于培养箱，第一次消化务必注意时间，每隔1min置于镜下观察细胞形态，防止消化过渡影响细胞状态）。

b、待细胞收缩变圆后，加入加3~5ml完全培养基终止消化，用移液枪小心吹打细胞，使培养瓶中的细胞完整脱落，随后将细胞悬液转移到无菌离心管，1200rpm，离心5min，小心去除细胞上清，用新鲜培养基重悬细胞后转移到新培养瓶中进行传代培养。待细胞密度达到80-90%后重复传代操作或者进行冻存。

悬浮细胞

a、可以采用半数换液法，将原细胞混匀后，取出一半至新的培养瓶中，补足新鲜培养液，如果细胞长势较快，密度交大也可以分多瓶后补足培液进行培养。

b、悬浮细胞亦可吸至离心管中1000rpm，离心5min后去除上清，加入新鲜培液重悬后进行分瓶培养。注意细胞重悬时吹打不可过重，否则容易损伤刺激细胞，导致某些细胞成团，状态不佳。

c、细胞培养液不可过酸，待细胞密度达到80%左右需进行传代操作或者将细胞冻存。

半贴壁半悬浮细胞

d、可以将悬浮的细胞进行离心收集，贴壁部分的细胞可消化后用新鲜培液重悬，将两部分细胞混悬后分瓶培养。若只有极少数悬浮细胞，也可以用贴壁细胞的操作方法进行传代。

e、对于贴壁不是很牢的细胞，可以直接用移液枪吹打使贴壁部分的细胞脱落，离心收集后进行分瓶传代培养。

2、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取

培养注意事项

收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。 

2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。 

3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。 

4、贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。 

5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。 

6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 

7、该细胞仅供科研使用。 

8、备 注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞,收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。 

9、注 意：1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。