细胞筛选

该细胞为已经稳定转染LUC的细胞，随细胞传代次数的增加，其LUC荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。细胞经过20μg/ml嘌呤霉素筛选，平时培养可维持10μg/ml嘌呤霉素。

细胞培养操作

1、复苏细胞
以下细胞培养冻存处理仅供参考 ，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻 ，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min ，弃去上清液 ，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中 ，加入约4 mL完全培养基 ，培养过夜） 。第三天换液并检查细胞密度。

2、细胞传代:  如果细胞密度达 80%-90% ，即可进行传代培养。 

a、弃去培养上清 ，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（ 0.25%Trypsin-0.02%EDTA） 于培养瓶中 ，使消化液浸润所有细胞 ，将培养瓶置于   37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定） ，然后在显微镜下观察细胞消化情况 ，若细胞大部分 变圆并脱落 ，迅速拿回操作台 ，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离 心管中 ，1000 rpm离心5 min ，弃去上清液 ，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中 ，置于培养箱中培养。

3、细胞冻存: 待细胞生长状态良好时 ，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液 ，装入无菌离心管中 ， 1000 rpm条件下离心4 min ，弃去上清液 ，用PBS清洗 一遍 ，弃尽PBS ，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液 ，使细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀 ，每支冻存管冻存 1mL细胞悬液 ，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱 ， 24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项

1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好 ，培养液是否有漏液 、浑浊等现象 ，若有上述现象 发生请 及时和我们联系。

2、仔细阅读细胞说明书 ， 了解细胞相关信息 ， 如细胞形态 、 所用培养基 、 血清比例、 所需细胞因子等 ，确保细胞培养条件一致 ，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题 ，责任由 客户自行承担。

3、 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面 ， 显微镜下观察细胞状态。 因运输问题 ， 部分细胞由于温度 变化及 剧烈碰撞死亡破碎形成碎片 ，是正常现象。观察好细胞状态后 ， 75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于37℃培养箱放置 2-4h。

4、 贴壁细胞可以消化 ，悬浮细胞直接混匀收集细胞 ， 900 rpm-1000 rpm 离心3 min ，弃上 清。加5 mL PBS 重悬细胞 ，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min ， 用新鲜的完全培养基重悬 细胞 ，并接种 到新的培养瓶或培养皿中 ，置于培养箱中进行培养。

5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片 ，记录细胞状态 ，便于和我司技术部沟通 交流。 由 于运输的原因 ，个别敏感细胞会出现不稳定的情况 ，请及时和我们联系 ， 告知细胞 的具体情况 ， 以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7、该细胞仅供科研使用。

8、备 注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞 ，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1： 2 传代 。

9、注 意：1 : 2传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个 10cm 皿。