线粒体染色试剂盒-绿色荧光

产品简介

M18线粒体染色试剂盒是利用M系列探针进行线粒体特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的M18线粒体染色探针为绿色荧光标记的线粒体探针，具有506/530nm的最大激发/发射波长。 M系列探针是对活细胞中的线粒体进行选择性染色的一类荧光染料，该系列探针可以选择性标记线粒体，只需要纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞。M系列探针可自由穿过细胞膜，适用于观察线粒体内部生物合成及相关发病机理。

试剂盒组合

各组份储存条件

1、染色液-20℃避光保存，

2、稀释液 2-8℃保存

【注】

1、染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

2、染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3、可以用手捂住使其融解或37C短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

4、试剂拆封后请尽快使用完。

储存条件

2-8°C避光保存

【注】

1、开盖后组份按要求条件保存。

2、拆封后请尽快使用完

有效期

六个月

M18荧光光谱

检测方法

流式细胞仪

荧光显微镜

激光共聚焦

样本类型

悬浮细胞

贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器

仪器准备

1、荧光显微镜/激光共聚焦/流式细胞仪

2、离心机

3、移液器

4、冰箱

5、冰盒

试剂准备

1、PBS缓冲液( pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X))( phosphate buffer saline/Dulbecco's PBS:约含8mM NazHPO:、2mMKHPO4、137mM NaCI和3mM KCI)

2、或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution: With:Calcium MagnesiumGlucose: Without: Phenol Red。Components:CaClz(anhydrous)140mg/L(1.261mM)、MgClz-6HzO 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7HzO100mg/L(0.407mM)、KCI 400mglL (5.333mM)、KH,PO460mglL(0.441mM)、NaHCO,350mg/L(4.167mM)、NaCl8000mg/L(137.931mM)、NagHPOa(anhydrous)48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM)

耗材准备

1、离心管

2、吸头

3、一次性手套

使用注意事项

1、M18染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

2、使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

3、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

4、标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

5、染色后立即进行分析。

染色工作液配制

1、根据样本数量，用染料稀释液将M18荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者

【注】

1、也可以直接用相应的培养基或HBSS等缓冲液稀释MI8染料至所需浓度。

2、建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20°C避光冻存，一年稳定。开始实验前，使用培养基或HBSS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度500-2500倍稀释。

3、工作液现配现用。

4、为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

5、若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减

细胞染色

1、对于贴壁细胞

2、将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

3、待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37C预热的含探针工作液。于生长状

4、态下孵育30分钟~2小时（具体孵育时间需根据细胞类型而定)。

5、利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片〉下观察。

【注】

1、若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

2、对于悬浮细胞

3、离心，吸除上清。

4、利用37°℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30分钟~2小时(具体时间需根据细胞类型而定)。

5、离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。

6、置于荧光镜下观察。

【注】

1、对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

2、若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

观察结果

1、在激光共聚焦显微镜/荧光显微镜（含合适滤片）下观察细胞。最大激发/发射波长为506/530nm。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，

避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并

彻底清除残留清洁剂。

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。