7-AAD染色试剂盒

产品简介

1、7-Aminoactinomycin D，简称7-AAD，是一种核酸染料，与 DNA结合后可发出强烈的荧光，其荧光特性与PI相似，可被488nm氩离子激光激发，但其发射光谱较PI窄，且发射波长更长，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，可与多种488激发光激发的荧光染料联合使用，如FITC，PE等。

2、7-AAD是一种非渗透性荧光染料，可以用来检测无活性的细胞。该染料不能透过活细胞的细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜，染料一旦进入细胞，它将结合到细胞内DNA分子上，形成具有高荧光性的加成物，可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞，广泛用于流式细胞仪。

3、7-AAD最大激发波长为546nm，最大发射波长为647nm，可在流式细胞仪下(FL3通道)检测荧光强度。

试剂盒组合

各组份储存条件

染料-20℃避光保存

【注】

1、染料长期不用-20℃保存。避免反复冻融。

2、染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3、可以用手捂住使其融解或37C短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

4、试剂拆封后请尽快使用完。

有效期

六个月

7-AAD荧光光谱

检测方法

流式细胞仪

荧光显微镜

样本类型

悬浮细胞

贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器

仪器准备

1、荧光显微镜/激光共聚焦/流式细胞仪

2、离心机

3、移液器

4、冰箱

5、冰盒

试剂准备

1、PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）

2、或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1、离心管

2、吸头

3、一次性手套

使用注意事项

1、染色液为 DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

2、使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

3、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

4、标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

5、染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

6、 染色后立即进行分析。

7、 7-AAD染色一般在其它染色完成后再进行，且仅仅染色死细胞。

8、本染色试剂盒可用于大多数细胞，但不同的细胞类型、细胞密度、使用的培养基以及其他一些因素都有可能影响染色效果，本说明仅供参考。其他方法请参阅相关资料。

染色工作液的配制

9、根据样品数用相应的培养基或合适的缓冲液(如HBSS)将7-AAD染色液100倍-200倍稀释，配制成染色工作液。

【注】

1、首次实验建议在推荐的工作浓度范围内设置浓度梯度检测，从而摸索最佳的染色浓度。

2、根据自身样本选择合适的步骤制备细胞样本。7-AAD染色一般在其它染色完成后再进行，且仅仅染色死细胞。

3、离心收集细胞，用500pul染色工作液重悬细胞

【注】

1、贴壁细胞可在盖玻片或者培养板上进行原位染色。

2、孵育15-60分钟。

3、用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。染料-DNA复合物的最大激发波长为545nm,

4、最大发射波长为650nm。可以用488nm波长激发。流式细胞仪下(FL3通道)检测荧光强度。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，

避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并

彻底清除残留清洁剂。

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。