DAPI染色试剂盒

产品简介

1、DAPI染色试剂盒用于普通的细胞核染色，也可用于细胞凋亡检测以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或激光共聚焦或流式细胞仪检测。

2、DAPI(diamidino-2-phenylindole)能与双链 DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA 的方法。DAPI的荧光强度较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst:其特异性较溴化乙啶和碘化丙啶高。

试剂盒组合

各组份储存条件

染色液2-8℃避光保存，

试剂B 2-8℃保存

储存条件

2-8°C避光保存

【注】

长期不用可以-20°C保存

染色液避免反复冻融。需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20°C保存

有效期

六个月

DAPI荧光光谱

检测方法

流式细胞仪

荧光显微镜

激光共聚焦

样本类型

悬浮细胞

贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器

仪器准备

1、荧光显微镜/激光共聚焦/流式细胞仪

2、离心机

3、移液器

4、冰箱

5、冰盒

试剂准备

1、PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）

2、或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1、离心管

2、吸头

使用注意事项

1、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。染色后立即进行分析。

3、染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

4、本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。

5、根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。

6、活细胞原位染色不同细胞需要的时间差异较大，可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育30分钟-4小时，或更长时间。

7、以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色。以下方法仅供参考，也可以请参阅相关资料使用其他方法。

染色工作液的配制

1、根据样品数用PBS将DAPI染色液10-100倍稀释，配制成染色工作液。

【注】

1、也可用培养基或其它缓冲液稀释。

2、原位染色时，也可以不稀释，直接按合适的终浓度加入培养基混匀。

3、工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。50倍稀释适合大多数细胞样本。

4、检测贴壁细胞时，胰酶消化前，去掉的上清也要保留，因为可能存在一些掉下来的凋亡细胞，在胰酶消化后，再将这些上清加回去，一起检测，结果更加准确。

5、离心转速根据平时该细胞实验时的转速即可

细胞爬片/涂片的制备

1、贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。

【注】

1、也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。

2、对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000g 离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次,收集调整细胞数为1X10°/ml,涂片或用离心涂片,用4%多聚甲醛固定5min;。

用PBS洗涤涂片两次

加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-30分钟

1、贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。

【注】

1、活细胞原位染色时，不同细胞需要的时间差异较大，一般大部分细胞10-30 分钟即可。有些细胞可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育30分钟-2小时。

2、 根据预实验结果调整染色时间。

吸除染色液

用1X洗涤液洗涤涂片

【注】

1、用纯水10倍稀释试剂B，充分混匀，即为1X洗涤液。

用荧光显微镜检测结果

1、染料-DNA复合物的最大激发波长为360nm，最大发射波长为454nm.。

结果分析

1、置于荧光显微镜下用360nm激发光观察结果:DAPI染色呈蓝白色荧光。

2、早期凋亡细胞呈现核浓缩，染色加深，或核染色质呈新月形聚集于核膜一边;晚期凋亡细胞表现为核碎裂成大小不等的圆形小体，并被细胞膜所包绕，即凋亡小体。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，

避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并

彻底清除残留清洁剂。

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。