WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

细胞简介

WST-1细胞增殖检测试剂盒采用WST-1检测细胞活性、增殖、毒性等的试剂盒。可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。

WST-1是广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂。WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。

WST-1是MTT的一种升级替代产品，和 MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS 等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解;而WST-1产生的formazan是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。WST-1产生的 formazan 比 XTT 和 MTS产生的 formazan更易溶解。WST-1比XTT和 MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。

WST-1细胞增殖检测试剂盒使用时无须同位素，所有的检测步骤仅在同一块96 孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan。WST-1对细胞无明显毒性。加入WST-1显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

试剂盒组成

组份储存条件

1、染色液2-8℃保存

2、避免反复冻融

【注】

1、长期不用可以-20℃保存。

2、冻存后融解时注意重新混匀。

3、染色液迹免反复冻融。

4、染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。

5、试剂拆封后请尽快使用完。

储存条件

2-8°C避光保存

有效期

一年

【注】

1、开盖后组份按要求条件保存。

2、拆封后请尽快使用完！

检测方法

酶标仪

适用样本

动物细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器

仪器准备

1、带有450nm波长的酶标仪

2、CO2培养箱

3、离心机

4、移液器

5、冰箱

6、冰盒

试剂准备

1、或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution: With: Calcium Magnesium Glucose:Without: Phenol Red。Components: CaCl2(anhydrous) 140mg/L(1.261mM)、MgCl2-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCI400mg/L (5.333mM)、KH,PO: 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3,350mg/L(4.167mM)、NaC1 1000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous)48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM)。

PBS 缓冲液(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X) )(phosphate buffer saline/Dulbecco's PBS:约含8mM Na,HPO,、2mM KH,PO,、137mM NaC1和3mM KC1)。

试剂准备

1、离心管

2、吸头

3、一次性手套

使用方法

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2、接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

3、有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。

4、若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加wST-1试剂。含有酚红的培养基可用于本试剂盒做细胞活性的测定。

5、如果不是使用96孔板检测，WST-1溶液的用量相应等比例增加即可。

6、加细胞悬液100ul(约5000-10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充)。每板设对照（加100ul 培养基)。

7、置37°C，5% CO2孵育过夜，倒置显微镜下观察。

8、每孔加入10 ul 待检测药物溶液，37°C孵育。

【注】

1、此处以药物处理的细胞为例，也可能是其他方法制备的待测细胞模型。

2、每孔加入10 ul WST-1溶液，37°C孵育1-4小时。

3、测定450 nm各孔的吸光值，如无450nm滤光片，可以使用430-48Onm 的滤光片。

4、同时设置空白孔(培养基和WST-1溶液，无细胞)，对照孔(不加药培养基和 WST-1溶液，有细胞)，每组设定3-5复孔。

结果分析，胞活力计算

1、将各测试孔的OD值减去空白孔 OD值。各重复孔的OD值取平均数。

2、细胞活力%=(加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD) ×100。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。